Бактериологический метод исследования: этапы, цели, характеристика

Расшифровка результатов

Стандартный результат сводится к двум пунктам анализа:

• качественный анализ с определением факта наличия/отсутствия определенного возбудителя;
• количественный анализ с указанием числа микроорганизмов на единицу объема – выражают в КОЕ (колониеобразующие единицы). Чем выше этот показатель, тем сильнее бактериальное поражение организма данным возбудителем.

Внимание! Отрицательный результат является относительным и показывает отсутствие патогенных организмов лишь в отдельно взятой порции материала. Для большей объективности данных требуется повторное обследование

Дополнительно указывают чувствительность микроорганизмов к основным классам антибактериальных средств – пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам, макролидам. Чем выше показатель чувствительности, тем успешнее будет лечение данным антибиотиком.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

• раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
• висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

• микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
• биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
• серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
• биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

6.10.1. Санитарно-показательные микроорганизмы

Санитарно-показательные
микроорганизмы (СПМ)
– это представители нормальной
микрофлоры, которые выделяются
естественным путем в окружающую среду
и там сохраняются, поэтому служат
показателями санитарного неблагополучия,
потенциальной опасности исследуемых
объектов. Так, если на объектах обнаруживают
нормальных обитателей кишечника, делают
заключение о наличии фекального
загрязнения и возможном присутствии
патогенных энтеробактерий. Так как
патогенных представителей меньше и
выделить их труднее, то вначале выявляют
санитарно-показательные микроорганизмы
в окружающей среде, а после их выявления
можно проводить поиск патогенных.

СПМ условно
разделяют на 3 группы:

1.Группа
А включает
обитателей кишечника человека и животных,
эти микроорганизмы расценивают как
индикаторы фекального загрязнения. В
нее входят бактерии группы кишечной
палочки (БГКП) – эшерихии, энтерококки,
протеи, сульфитвосстанавливающие
клостридии (С.
perfringens),
термофилы, бактериофаги, ацинетобактер,
аэромонады.

2.Группа
В включает
обитателей верхних дыхательных путей
и носоглотки. В нее входят a-
и b-гемолитические
стрептококки, стафилококки
(плазмокоагулирующие, лецитиназоположительные,
гемолитические и антибиотикоустойчивые).

3.Группа
С включает
сапрофитические микроорганизмы,
обитающие во внешней среде, их расценивают
как индикаторы процессов самоочищения.
В нее входят бактерии-аммонификаторы,
бактерии-нитрификаторы, некоторые
спорообразующие бактерии, грибы,
актиномицеты, целлюлозобактерии,
сине-зеленые водоросли.

Санитарно-показательные
микробы должны отвечать следующим
требованиям:
они должны постоянно содержаться в
выделениях человека и теплокровных
животных и поступать в окружающую среду
в больших количествах; не должны иметь
другого природного резервуара, кроме
организма человека и животных; после
выделения их в окружающую среду, должны
сохранять жизнеспособность в течение
сроков, близких к срокам выживания
патогенных микробов, выводимых из
организма теми же путями; СПМ не должны
размножаться в окружающей среде; не
должны изменять свои биологические
свойства в окружающей среде; должны
быть типичными, чтобы их диагностика,
индикация и идентификация осуществлялась
без особого труда.

Санитарно-показательные
бактерии окружающей среды.

1.Вода
– бактерии группы кишечной палочки
(БГКП), энтерококки, стафилококки.

2.Почва
– БГКП, энтерококки, термофилы, возбудители
газовой гангрены.

3.Воздух
– бета-гемолитические стрептококки,
стафилококки.

4.Пищевые
продукты – БГКП, энтерококки, стафилококки,
протей.

5.Предметы
обихода – БГКП, фекальные стрептококки,
стафилококки.

Современные методы бактериологического исследования

Все бактериологические исследования можно разделить на две группы в зависимости от того, каков предполагаемый результат.

I. Исследуемый объект должен быть стерилен.

В такой ситуации обнаружение любого микроорганизма является поводом для серьезного беспокойства. О чем идет речь? О крови, моче, материнском молоке, спинномозговой жидкости. Принципиально другой вопрос состоит в том, что взять для бактериологического исследования мочу или молоко и не нарушить при этом стерильности — очень сложно и практически невозможно в амбулаторных условиях. Неудивительно, что к положительным результатам, когда в моче или молоке обнаруживается некая бактерия, врачи часто относятся с определенной (весьма значительной) долей скепсиса. Никогда не бывает стопроцентной уверенности в том, что этот микроб действительно живет в молоке, а не попал туда с поверхности кожи, действительно живет в моче, а не на слизистой оболочке мочеиспускательного канала.

II. Для исследования берется заведомо нестерильный материал.

Всегда, когда изучается нечто, находящееся в контакте с окружающей средой, это нечто содержит бактерии. Любые мазки со слизистых оболочек, любые современные исследования слизи, мокроты, кала в обязательном порядке заканчиваются тем, что будет найдено определенное количество самых разнообразных микробов. Обнаруженные микробы по-разному взаимодействуют с человеческим организмом. Это позволяет выделить три группы бактерий:

1.

Бактерии нормальные, мирные, безвредные или даже полезные, являющиеся естественными обитателями исследуемой среды;

2.

Бактерии опасные, с большой долей вероятности способные вызвать болезнь — патогенные. Их обнаружение — тревожный сигнал, повод к углубленному обследованию, лечению;

3.

Бактерии условно-патогенные — бактерии, мирно сосуществующие с организмом человека, но потенциально опасные, способные вызвать болезнь при определенных обстоятельствах, которые в большинстве случаев возникают тогда, когда ослабевает иммунная защита организма ребенка.

Алгоритм бактериологического исследования

Узнать имя микроба — это далеко не все, хотя и очень важно. Ведь обнаружить некую бактерию — например, в мазке из носа золотистый стафилококк — вовсе не значит доказать, что именно он является причиной насморка: вполне возможно, что стафилококк живет себе мирно в носоглотке, а насморк вирусный или аллергический

Как же разобраться?

Во-первых, понимать, что любые бактериологические исследования — это дополнительная диагностика, а основная диагностика — это реальные жалобы и симптомы.

Во-вторых, следует знать, что современные культуральные методы бактериологической диагностики позволяют не только обнаружить микроб, но и определить, какое количество бактерий присутствует во взятом для исследования материале. В результате мы получим из лаборатории бланк бактериологического исследования, в котором увидим не только имя бактерии, но и ее концентрацию. Выглядит это примерно так: «Обнаружен S. aureus 106», что означает: обнаружен золотистый стафилококк в концентрации 106 микробных клеток на миллилитр (м.к./мл).

Выявив рост бактерий, можно ответить на вопрос, к каким антибактериальным средствам (антибиотикам) они (бактерии) чувствительны. Для этого в питательную среду добавляют различные современные препараты и оценивают, прекращается ли размножение микробов. Прекращается — значит, бактерия чувствительна к данному антибиотику, не прекращается — устойчива.

Виды бактериоскопии анализов

Бактериоскопия анализов кала

Для бактериоскопического исследования анализа кала необходим образец анализа пациента. Если необходимо провести анализ микрофлоры кишечника, нарушения в составе которой свидетельствуют о наличии дисбактериоза или инфекционных заболеваний пищеварительной системы, забор образца проводится с помощью петли, которая вводится в анальное отверстие примерно на 10 сантиметров вглубь.

При исследовании образца кала могут быть обнаружены следующие опасные микроорганизмы:

• Стафилококки.
• Клебсиелла, наличие которой свидетельствует о поражении толстой кишки.
• Синегнойная палочка, выделяющая крайне опасные для человека токсины.

Наличие синегнойной палочки в организме человека может привести к заражению крови и менингиту – заболеваниям, которые могут иметь летальный исход.

Бактериоскопия анализов мочи

Анализ мочи для бактериоскопического исследования сдается при подозрении на воспаление мочевыделительной системы и наличие таких болезней, как пиелонефрит и цистит, возбудителями которых являются кишечная палочка и некоторыми возбудителями заболеваний, передающихся половым путем, соответственно. Для такого исследования необходимо от 50 до 100 мл мочи, причем моча должна храниться в стерильном контейнере. Перед сдачей анализа необходимо хорошо подмыться, чтобы в моче было меньше сторонних примесей. Не рекомендуется сдавать мочу во время менструации.

Бактериоскопический анализ мочи незаменим для обнаружения заболеваний мочевыделительной системы у грудных детей. В этом случае моча собирается через катетер в стерильную емкость. Исследование образца мочи необходимо провести в кратчайшие сроки, иначе обнаружение возбудителей заболеваний будет затруднено.

Бактериоскопия мокроты

При анализе мокроты исследуются два мазка. Один из них изучается на предмет наличия палочек Коха – возбудителей туберкулеза. По результатам исследования второго делаются выводы о наличии в мокроте других микробов.

Для анализа на предмет наличия других микробов образец окрашивают по методу Грама. С помощью бактериоскопического метода с применением окрашивания по методу Грама возможно выявление пневмококка – бактерии, являющейся причиной пневмонии. Также при работе с образцом по такой схеме можно выявить наличие в мокроте стрептококков – возбудителей ангины, а также золотистого стафилококка. Последний микроорганизм представляет особую опасность для здоровья человека. Он провоцирует гнойные процессы и образование абсцессов, в том числе и на внутренних органах.

Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Брюшной
тиф и паратифыА
и В—
острые кишечные инфек­ции,
характеризующиеся поражением
лимфатического аппарата ки­шечника,
выраженной интоксикацией. Их возбудителями
явля­ются соответственно Salmonellatyphi,
Salmonellaparatyphi
А и
Salmonellaschottmuelleri.

Таксономическое
положение.
Возбудители брюшного тифа и паратифов
А
и
В
относятся
к отделу Gracilicutes,
семей­ству
Enterobacteriaceae,
роду
Salmonella.

Морфологические
и тинкториальные свойства.
Сальмонеллы — мелкие грамотрицательные
палочки с закругленными конца­ми. В
мазках располагаются беспорядочно. Не
образуют спор, имеют микрокапсулу,
перитрихи.

Культуральные
свойства.
Сальмонеллы — факульта­тивные
анаэробы. Оптимальными для роста являются
темпера­тура 37С. Растут на простых
питательных средах. Элективной средой
для сальмонелл является желчный бульон.

Биохимическая
активностьсальмонелл
достаточно высока, но они не сбраживают
лактозу. S.typhiменее
активна, чем возбудители паратифов.

Антигенные
свойства и классификация.
Сальмо­неллы имеют О—
и
H-антигены,
состоящие из ряда фракций. Каждый вид
обладает определенным набором антигенов.
Все виды сальмонелл, имеющие общую так
назы­ваемую групповую фракцию
0-антигена, объединены в одну группу.
Таких групп в настоящее время насчитывается
около 65. S.typhiи
некоторые другие сальмонеллы имеют
Vi—антиген
(раз­новидность К-антигена), с этим
антигеном связывают вирулен­тность
бактерий, их устойчивость к фагоцитозу.

Факторы патогенности.
Сальмонеллы образуют эндо­токсин,
обладающий энтеротропным, нейротропным
и пирогенным действием. С белками
наружной мембраны связаны адгезивные
свойства, наличие микрокапсулы
обусловливает устойчивость к фагоцитозу.

Резистентность.
Сальмонеллы довольно устойчивы к низ­кой
т-ре. Очень чувствительны к дезинфицирующим
веществам, высокой температуре,
ультрафиолетовым лучам. В пищевых
продуктах (мясе, молоке) сальмонеллы
могут не только долго сохраняться, но
и размножаться.

Эпидемиология.
Брюшной тиф и паратиф А
—
антропонозные инфекции; источником
заболевания являются больные люди и
бактерионосители. Источником паратифа
В
могут
быть также сельскохозяйственные
животные. Механизм заражения
фекально-оральный. Среди путей передачи
преобладает водный.

Патогенез.
Возбудители попадают в организм через
рот, достигают тонкой кишки, где в ее
лимфатических образованиях размножаются
и затем попадают в кровь (стадия
бактериемии). С током крови они разносятся
по всему организму, внедряясь в
паренхиматозные органы (селезенку,
печень, почки, костный мозг). При гибели
бактерий освобождается эндотоксин,
вызывающий интоксикацию. Из желчного
пузыря, где С. могут длительно сохраняться,
они вновь попадают в те же лимфатические
образования тонкой кишки. В результате
повторного поступления С. может развиться
аллергическая реак­ция, проявляющаяся
в виде воспаления, а затем некроза
лим­фатических образований. Сальмонеллы
выводятся из организма с мочой и калом.

Клиника.
Клинически брюшной тиф и паратифы
неразли­чимы. Инкубационный период
составляет 12 дней. Болезнь начинается
остро: с повышения температуры тела,
по­явления слабости, утомляемости;
нарушаются сон и аппетит. Для брюшного
тифа характерны помутнение сознания,
бред, галлюцинации, сыпь. Очень тяжелыми
осложнениями являются прободение стенки
кишки, перитонит, кишечное кровотечение,
возникающие в результате некроза
лимфатических образований тонкой кишки.

Иммунитет.
После перенесенной болезни иммунитет
проч­ный и продолжительный.

Микробиологическая
диагностика.Основной
метод диа­гностики — бактериологический:
посев
и выделение S.
typhi
из крови (гемокультура), фекалий
(копрокультура), мочи (урино-культура),
желчи, костного мозга. РИФ для обнаружения
антиге­на возбудителя в биологических
жидкостях. Серологический
ме­тод обнаружения
0- и Н- антител в РПГА. Бактерионосителей
выявляют по обнаружению Vi-антител
в сыворотке крови с по­мощью РПГА и
положительному результату
бактериологического; выделения
возбудителя. Для внутривидовой
идентификации применяют фаготипирование.

Лечение.
Антибиотики. Иммуноантибиотикотерапия.

Профилактика.
Санитарно-гигиенические мероприятия.
Вакци­нация — брюшнотифозная химическая
и брюшно-тифозная спиртовая вакцина,
обогащенная Vi-антигеном.
Для экстренной профилактики —
брюшнотифозный бакте­риофаг.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. Выращивание культуры на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам

При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Питательные среды

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
стафилококков)____________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
сальмонелл)_______________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
стафилококков)____________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
сальмонелл)_______________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост S.aureus
и S.saprophiticus)______________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
стафилококков)____________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
сальмонелл)_______________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:
(опишите рост кишечных палочек и
стафилококков)____________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Семейство
Enterobactericeaeвключает 12
родов:Escherichia,Salmonella,Shigellaи др. бактерии этого
семейства имеют общие морфологические
и физиологические свойства: все они
грамотрицательные палочки, без спор,
неприхотливы к питательным средам,
факультативные анаэробы, имеют
многочисленные сахаролитические,
протеолитические ферменты. Антигенное
строение служит одним из существенных
критериев, на которых основывается
классификация, а так же идентификация
энтеробактерий. Различают три типа
антигенов: О-соматический, у некоторых
Н-жгутиковый, К-антигены, у энтеробактерий
обнаружены общие антигены. Один них –
антиген Кунига – связан с ЛПС.